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長期有效 |
應(yīng)用實驗原理實驗操作 專題
中文名稱 | 人細胞周期素D2(CYCLIN-D2)ELISA試劑盒 |
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中文同義詞 | 人細胞周期素D2(CYCLIN-D2)ELISA試劑盒 |
英文名稱 | Human Cyclin D2 (CYCLIN-D2) ELISA Kit |
英文同義詞 | |
CAS號 | |
分子式 | |
分子量 | 0 |
EINECS號 | |
相關(guān)類別 | |
Mol文件 | Mol File |
結(jié)構(gòu)式 |
應(yīng)用
人細胞周期素D2(CYCLIN-D2)ELISA試劑盒用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)細胞周期素D2(CYCLIN-D2)的含量檢測。
實驗原理
人細胞周期素D2(CYCLIN-D2)ELISA試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(elisa)。往預(yù)先包被人細胞周期素D2(Cyclin-D2)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人細胞周期素D2(Cyclin-D2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
實驗操作
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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