詳細說明
-
- 針對種屬：mouse
- 質粒由來源于 GeCKO (v2)庫的NNT-1/BSF-320 nt向導RNA組成。
- 向導RNA指導Cas9蛋白去誘導基因組DNA中的位點專一的雙鏈破裂（DSB）
- 除慢病毒激活顆粒外，其他產(chǎn)品均為轉染即用型純化DNA質粒。慢病毒激活顆粒預包被成慢病毒顆粒的形式，適用于難被轉染的細胞
Description
See Protocol Online.
HDR Plasmid- 20 µg 純化的即用型的質粒DNA，最多可供20次轉染
- 為保證最大敲除效率，NNT-1/BSF-3 CRISPR/Cas9 敲除質粒 (m) 包含三個質粒，每個質粒都編碼Cas9 核酶和 NNT-1/BSF-3-特異性20nt向導RNA.
- gRNA 序列來源于 GeCKO (v2)文庫，指導Cas9蛋白去誘導基因組DNA雙鏈中一個特異位點的斷裂。
- 如果需要篩選Cas9成功誘導雙鏈斷裂的細胞，推薦用 NNT-1/BSF-3 HDR質粒(m) (sc-425268-HDR) 共轉染。
- 關于對照抗體的可用性，請聯(lián)系技術服務
See Protocol Online.
Description
See Protocol Online.
Double Nickase Plasmids- 20 µg 純化的即用型的質粒DNA，最多可供20次轉染
- 推薦用 NNT-1/BSF-3 HDR 質粒 (m) 和 NNT-1/BSF-3 CRISPR/Cas9 KO 質粒 (m) CRISPR/Cas9敲除質粒共轉染 (m)
- NNT-1/BSF-3 HDR 質粒 (m) 包含2-3種質粒，每一種都含有一個同源介導的雙鏈DNA修復（HDR）模板，與 NNT-1/BSF-3 CRISPR/Cas9 KO 質粒 (m) 的剪切位點相對應
- 每個HDR質粒包含兩個800個bp同源臂，可特異地結合到相應的Cas9誘導的雙鏈DNA破壞位點附近的基因組DNA
- 每個HDR質粒中嵌入了一個嘌呤霉素抗性基因，從而能篩選出穩(wěn)定敲除（KO）細胞，以及一個RFP（紅色熒光蛋白）基因，可用于觀察驗證轉染情況
- 嘌呤霉素抗性基因和紅色熒光蛋白基因的兩側是兩個LoxP位點，以便與接下來的Cre Vector sc-418923處理
See Protocol Online.
Description
See Protocol Online.
CRISPR Activation Plasmids- 20 µg 純化的即用型的質粒DNA，最多可供20次轉染
- NNT-1/BSF-3 雙切口酶質粒（m）含有一對質粒，分別編碼D10A突變的Cas9核酸酶，和目標特異的 20 nt 向導RNA （gRNA），與其相應的NNT-1/BSF-3 CRISPR/Cas9敲除質粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特異性
- 成對的向導RNA序列與目標基因中約20個堿基對互補，從而使Cas9可以模仿DNA雙鏈斷裂（DSB），介導特異的基因組DNA雙切割
- 質粒對中的一個包含供篩選使用的嘌呤霉素抗性基因；另一個包含供觀察轉染使用的綠色熒光蛋白標記
- NNT-1/BSF-3雙切口酶質粒(m2)編碼的成對的向導RNA與NNT-1/BSF-3雙切口酶質粒(m)的編碼的向導RNA不同
See Protocol Online.
Description
See Protocol Online.
Lentiviral Activation Particles- 20 µg 純化的即用型的質粒DNA，最多可供20次轉染
- NNT-1/BSF-3 CRISPER激活質粒（m）是一種協(xié)同激活介質（SAM）轉錄激活系統(tǒng)，目的在于特定上調(diào)基因表達
- NNT-1/BSF-3 CRISPR激活質粒（m）包含三種質量比為1:1:1的質粒：一種質粒編碼去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了轉錄活化域VP64和殺稻瘟菌素抗性基因；一種質粒編碼MS2-p65-HSF1融合蛋白和潮霉素抗性基因；一種質粒編碼目標特定的20 nt向導RNA和嘌呤霉素抗性基因
- 形成的SAM復合物結合到轉錄起始位點上游大約200-250 nt的特定位點區(qū)域，為高效激活基因提供轉錄因子的招募
- NNT-1/BSF-3 CRISPR激活質粒（m2）中編碼特異目標的 20 nt 向導RNA的單鏈 gRNA (MS2) 質粒不同于NNT-1/BSF-3CRISPR激活質粒(m）的gRNA
See Protocol Online.
Description
See Protocol Online.
- 200 µl 高滴度即用型CRISPR/dCas9慢病毒激活粒子
- NNT-1/BSF-3 慢病毒激活顆粒（m）是一種協(xié)同激活介質（SAM）轉錄激活系統(tǒng)，通過細胞慢病毒轉導，特異高效地上調(diào)目的基因的表達
- NNT-1/BSF-3慢病毒激活顆粒(m)包含以下SAM激活元素：一種是去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了轉錄活化域VP64；一種是MS2-p65-HSF1融合蛋白；一種是目標特定的20 nt向導RNA。它們還含有殺稻瘟菌素，潮霉素和嘌呤霉素抗性基因
- 一經(jīng)轉導，形成的SAM復合物結合到轉錄起始位點上游大約200-250 nt的特定位點區(qū)域，為高效激活基因，招募轉錄因子
- NNT-1/BSF-3 慢病毒激活顆粒（m2）中編碼的特異目標的 20 nt 向導RNA的gRNA不同于NNT-1/BSF-3慢病毒激活顆粒（m）中編碼的gRNA
See Protocol Online.
400-6226-992