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概念

細(xì)胞凋亡，也稱(chēng)為程序性細(xì)胞死亡，是機(jī)體為維持內(nèi)穩(wěn)態(tài)、正常發(fā)育，清除冗余，損壞或感染的細(xì)胞的一種主動(dòng)生理過(guò)程，也是一種防御機(jī)制。

特征

細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí)會(huì)有形態(tài)和生化改變的顯著特征。形態(tài)變化主要體現(xiàn)在細(xì)胞皺縮，體積變小，細(xì)胞質(zhì)膜起泡，到凋亡晚期時(shí)出現(xiàn)凋亡小體。凋亡小體包裹著細(xì)胞器和細(xì)胞核碎片，它們被巨噬細(xì)胞、薄壁細(xì)胞所吞噬，被吞噬溶酶體所降解，因而避免炎癥反應(yīng)的發(fā)生。生化改變的典型特征是染色體的固縮和DNA片段化。核小體間連接區(qū)的雙鏈DNA片段化后其大小均為寡核小體DNA長(zhǎng)度(180-200bp)的整倍數(shù)，因而在瓊脂糖凝膠電脈中呈現(xiàn)規(guī)則的“梯子”形(DNA ladder)?！癉NA ladder”的出現(xiàn)可作為判別細(xì)胞凋亡的特異性指標(biāo)，但若未檢出“DNA ladder”，亦不能排除凋亡的可能。



 

細(xì)胞凋亡可以在不同的刺激下誘導(dǎo)發(fā)生，在哺乳動(dòng)物中，細(xì)胞凋亡信號(hào)通路主要分為4類(lèi)：

線(xiàn)粒體通路：主要由多種壓力信號(hào)，例如，DNA化學(xué)損傷，UV輻射，生長(zhǎng)因子缺乏等引起，也稱(chēng)內(nèi)源細(xì)胞凋亡通路；

死亡受體途徑：由細(xì)胞表面的受體信號(hào)所介導(dǎo)，也稱(chēng)外源細(xì)胞凋亡通路；

T細(xì)胞參與的細(xì)胞死亡途徑：此通路中，顆粒酶A或顆粒酶B均可誘導(dǎo)凋亡；

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路：當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的蛋白折疊功能受到影響時(shí)，未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）將會(huì)被激活，繼而引發(fā)凋亡。

這四條信號(hào)通路既相互獨(dú)立又互相交叉，其核心的執(zhí)行者都是一類(lèi)蛋白：含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）。

          
 

細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法

1.檢測(cè)Caspase切割法
2.檢測(cè)Bcl-2家族蛋白表達(dá)
3.檢測(cè)p53蛋白表達(dá)
4.檢測(cè)細(xì)胞色素c的釋放
5.Annexin V和PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
6.TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡

通常情況下，需要聯(lián)合使用多種檢測(cè)手段增加說(shuō)服力，如通過(guò)WB檢測(cè)Caspase的自切割，對(duì)PARP的切割，Bcl家族蛋白的變化，通過(guò)流式檢測(cè)細(xì)胞水平上的凋亡情況，通過(guò)TUNEL檢測(cè)動(dòng)物水平上的凋亡情況。

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