? 服務介紹

       蛋白質免疫印跡法 (Western Blot ) ，簡稱WB ，是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質分離開，然后將目標蛋白轉移到載體(PVDF)膜上，利用抗原抗體的特異性結合，用特異性的一抗結合目標蛋白，用HRP標記的二抗結合一抗，再加以ECL發(fā)光液顯色，檢測組織或者細胞內某種或者某些特異性蛋白質的表達。蛋白質免疫印跡是做蛋白質分析的一種常規(guī)技術，常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析，還可以用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續(xù)分析。

? 實驗流程

       蛋白提取-制膠-電泳-轉膜-封閉-一抗孵育-二抗孵育-化學發(fā)光-結果分析;

? 實驗樣品要求

       （1）細胞不少于5×106個，收集細胞沉淀，干冰運輸。

       （2）組織樣品不少于50mg；

       （3）總蛋白濃度不低于 2μg/μl（至少50μl）；

? 注意事項

       （1）每張膜上做一種目的蛋白和相應的內參蛋白。每張膜上可以做8個樣品。一般狀況下，2周即可完成實驗。如遇特殊情況，如一抗不好，蛋白濃度低或蛋白特殊，如分子量大等，周期會有所延長。

       （2）Western Blot細胞蛋白樣本的準備及運輸：去掉培養(yǎng)液，用PBS洗一次后，加入少量PBS，用細胞刮將細胞刮下，用1ml槍吸取細胞易于1.5ml EP管中，快速離心（升至最高轉速就可stop）去除上清后，可按下面兩種方法運輸：A.細胞干運輸：將細胞干放入液氮速凍，-80℃保存; 如需長途過夜運輸，建議干冰運輸；如當天送達樣本，可用液氮或者-80℃冰袋運輸；B.細胞裂解液運輸：加入一定量的胞裂解液后即可冷藏運輸（冰袋或者冰盒）。如需檢測磷酸化蛋白，建議裂解液中加入終濃度1mM的NaF，NaF可抑制磷酸酶活性，保護蛋白磷酸化水平。如果加入裂解液后提取蛋白，則置于冰上裂解1 h，12000rpm離心10 min后取上清，即為蛋白樣本。蛋白樣本可-20度冷藏運輸（建議快遞寄送用干冰或者足量-80度冰袋），保存需要-80℃。

       （3）蛋白樣本運輸：蛋白樣本需要經過濃度測定，再進行變性，變性時先加入Sample buffer，再95℃ 10 min，Sample buffer可防止變性導致的蛋白沉淀析出。變性的蛋白可直接冷藏運輸，-20℃穩(wěn)定保存。