? 服務(wù)介紹

       蛋白提取是做WB的必要提取步驟。主要是將組織或細(xì)胞的蛋白分離提取出來(lái)，以便后續(xù)做WB檢測(cè)。蛋白提取主要可以提?。嚎偟鞍住麧{/胞核蛋白、線粒體蛋白、膜蛋白。

? 實(shí)驗(yàn)流程

       編號(hào)核對(duì)-組織取塊-組織勻漿-離心-蛋白定量-蛋白變性

? 實(shí)驗(yàn)樣品要求

       （1）細(xì)胞不少于5×106個(gè)；

       （2）組織樣品不少于50mg；

       （3）總蛋白濃度不低于 2μg/μl（至少50μl）；

? 注意事項(xiàng)

       （1）每張膜上做一種目的蛋白和相應(yīng)的內(nèi)參蛋白。每張膜上可以做8個(gè)樣品。一般狀況下，2周即可完成實(shí)驗(yàn)。如遇特殊情況，如一抗不好，蛋白濃度低或蛋白特殊，如分子量大等，周期會(huì)有所延長(zhǎng)。

       （2）Western Blot細(xì)胞蛋白樣本的準(zhǔn)備及運(yùn)輸：去掉培養(yǎng)液，用PBS洗一次后，加入少量PBS，用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下，用1ml槍吸取細(xì)胞易于1.5ml EP管中，快速離心（升至最高轉(zhuǎn)速就可stop）去除上清后，可按下面兩種方法運(yùn)輸：A.細(xì)胞干運(yùn)輸：將細(xì)胞干放入液氮速凍，-80℃保存; 如需長(zhǎng)途過(guò)夜運(yùn)輸，建議干冰運(yùn)輸；如當(dāng)天送達(dá)樣本，可用液氮或者-80℃冰袋運(yùn)輸；B.細(xì)胞裂解液運(yùn)輸：加入一定量的胞裂解液后即可冷藏運(yùn)輸（冰袋或者冰盒）。如需檢測(cè)磷酸化蛋白，建議裂解液中加入終濃度1mM的NaF，NaF可抑制磷酸酶活性，保護(hù)蛋白磷酸化水平。如果加入裂解液后提取蛋白，則置于冰上裂解1 h，12000rpm離心10 min后取上清，即為蛋白樣本。蛋白樣本可-20度冷藏運(yùn)輸（建議快遞寄送用干冰或者足量-80度冰袋），保存需要-80℃。

       （3）蛋白樣本運(yùn)輸：蛋白樣本需要經(jīng)過(guò)濃度測(cè)定，再進(jìn)行變性，變性時(shí)先加入Sample buffer，再95℃ 10 min，Sample buffer可防止變性導(dǎo)致的蛋白沉淀析出。變性的蛋白可直接冷藏運(yùn)輸，-20℃穩(wěn)定保存。