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親和層析柱空柱

親和層析是利用生物分子間所具有的專一親和力而設(shè)計(jì)的層析技術(shù)。

如抗原和抗體，蛋白質(zhì)A與-些抗體，重組蛋白質(zhì)和一些金屬離子之間，均具有專一的親和力，在一定條件下能緊密結(jié)合成復(fù)合物，而這種結(jié)合又是可逆的，改變條件可相互解離。

當(dāng)把可結(jié)合的一對(duì)分子的一方(稱配體)結(jié)合在惰性載體上使其固相化，另一方隨流動(dòng)相流經(jīng)該載體，雙方即結(jié)合為一整體。然后設(shè)法將它們解離，從而得到與配體有特異結(jié)合能力的某一特定的物質(zhì)。

索萊寶生物提供的親和層析柱空柱是專門為實(shí)驗(yàn)室小批量純化抗體、重組蛋白或其它分子而設(shè)計(jì)，方便進(jìn)一步進(jìn)行科學(xué)研究。

親和層析柱空柱所用的柱子為聚丙烯塑料，這種工程材料通過大量的應(yīng)用證明具有清潔無毒，不與生物分子結(jié)合和低溶解度的優(yōu)點(diǎn)。

親和層析柱空柱所用的篩板是選用純凈的UHWMPE為原料，經(jīng)獨(dú)特的工藝加工而成，具有親水性。篩板在裝填時(shí)安置在填料基質(zhì)的上下端，以阻擋昂貴的基質(zhì)滲出。

親水性篩板采用了領(lǐng)先的親水性UHWMPE生產(chǎn)技術(shù)，該篩板能保證使用重力法時(shí)的流速為1-2mL/分鐘或1-2滴/秒。同時(shí)，該篩板和其它供應(yīng)商相比，不會(huì)由于親水性基團(tuán)的引入而對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生吸附。另外，該親水性篩板在使用過程中不易形成氣泡，氣泡會(huì)使流速降低，液體通過基質(zhì)不均勻。

親和層析柱空柱可配套針筒注射器、裝柱推桿和聯(lián)接管，方便柱子的裝填并和蠕動(dòng)泵等設(shè)備配套使用。

親和層析柱空柱用于抗體純化

金黃色葡萄球菌蛋白A(Protein A,SPA)能與人及多種哺乳動(dòng)物血清IgG分子中的Fc片段結(jié)合，結(jié)合的親和性次序依次是豬、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛。

SPA除與IgG結(jié)合外，還能與血清中少量的IgM和IgA結(jié)合，SPA菌對(duì)各類免疫球蛋白的吸附率：IgG為90%～98%，IgM為2%～30%，IgA為1.5%～20%。

純化抗體一般用Protein A作為純化的配體，也可以用Protein G,Protein L或異源性抗體作為配體。

親和層析柱空柱用于小分子物質(zhì)提取

（以提取黃曲霉毒素M1為例）

試樣通過免疫親和柱時(shí),黃曲霉毒素M1被提取。親和柱內(nèi)含有的黃曲霉毒素M1特異性單克隆抗體交聯(lián)在固體支持物上,當(dāng)樣品通過親和柱時(shí),抗體選擇性的與黃曲霉毒素M1(抗原)鍵合,形成抗體一抗原復(fù)合體。用水洗柱除去柱內(nèi)雜質(zhì),然后用洗脫劑洗脫吸附在柱上的黃曲霉毒素M1,收集洗脫液。用帶有熒光檢測(cè)器的高效液相色譜儀測(cè)定洗脫液中黃曲霉毒素M1含量。

親和層析柱空柱用于重組蛋白純化

近年來，隨著生物技術(shù)，別是基因工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，重組蛋白表達(dá)和純化越來越容易。常用的重組蛋白表達(dá)策略是把蛋白與親和標(biāo)簽融合表達(dá)，利用親和標(biāo)簽一步純化出目標(biāo)蛋白。此方法無需了解蛋白質(zhì)的生化特性或生理活性，就可通過帶標(biāo)簽的重組融合蛋白選擇性地與層析基質(zhì)上的配體結(jié)合，從而得以純化任何蛋白質(zhì)。此方法與常規(guī)的層析方法不同之處在于，無需針對(duì)不同的蛋白質(zhì)開發(fā)特定的配體和方法。采用保護(hù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能完整性的溫和條件，可一步親和層析從粗提物中純化出重組蛋白，純度可達(dá)90％以上。

親和標(biāo)簽已成為后基因組學(xué)時(shí)代純化重組蛋白常用手段。親和標(biāo)簽系統(tǒng)一般具有以下特征：(a)一步的吸附純化；(b)對(duì)三級(jí)結(jié)構(gòu)和生物活性影響小；(c)可方便且專一的去除以產(chǎn)生天然蛋白質(zhì)；(d)在純化過程中重組蛋白的分析簡(jiǎn)便準(zhǔn)確；(e)適用于大量的不同蛋白質(zhì)。但是沒有哪個(gè)標(biāo)簽是完美的，只能根據(jù)實(shí)際需要去自己篩選，下表是部分的標(biāo)簽以及純化的方案。