產(chǎn)品描述

SIM HF 培養(yǎng)基是專門培養(yǎng)High Five ^TM細(xì)胞的無蛋白無血清添加培養(yǎng)基。

SIM HF 培養(yǎng)基僅供實(shí)驗(yàn)研究、工業(yè)生產(chǎn)，不可用于人體及動(dòng)物。

產(chǎn)品特點(diǎn)

產(chǎn)品參數(shù)

SIM HF 培養(yǎng)基為澄清淡黃色透明液體，2~8℃避光保存，如發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基變得渾濁或出現(xiàn)沉淀，請勿使用。

產(chǎn)品使用效果

細(xì)胞密度高

義翹神州的SIM HF培養(yǎng)基在昆蟲細(xì)胞BTI-TN-5B1-4 (High FiveTM)的培養(yǎng)上更具優(yōu)勢。

圖1.細(xì)胞生長密度檢測 Hi5細(xì)胞在SIM HF養(yǎng)基中的活細(xì)胞密度隨培養(yǎng)時(shí)間的變化。

產(chǎn)品使用方法

細(xì)胞培養(yǎng)、傳代

將細(xì)胞接種到搖瓶、大培養(yǎng)三角瓶或生物反應(yīng)器中，細(xì)胞培養(yǎng)體積勿超過搖瓶體積的1/3；

培養(yǎng)條件為27±1 ℃，搖床轉(zhuǎn)速為150 rpm（不同搖床轉(zhuǎn)速可能有差異，如細(xì)胞生長不好，請摸索最佳轉(zhuǎn)速，剛復(fù)蘇的細(xì)胞建議使用較低轉(zhuǎn)速進(jìn)行適應(yīng)性培養(yǎng)）；

當(dāng)細(xì)胞密度生長達(dá)到2~3×10⁶ cells/mL時(shí)，可以進(jìn)行傳代。

用新鮮的培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至合適密度（ 0.3-0.6×10⁶ cells/mL ），接種至合適的容器中。

細(xì)胞凍存

選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，保證活率大于90%；

制備細(xì)胞凍存液：45% 新鮮培養(yǎng)基，45% 條件培養(yǎng)基， 10% 二甲基亞砜溶液（DMSO） ；

200 g離心5 分鐘，棄去上清；

用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞， 取樣計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度；

迅速分裝細(xì)胞至無菌的凍存管中，每管1~2 mL，密封；

將凍存管放入程序降溫盒中，-70 ℃冰箱放置過夜； 如需要長期保存，在液氮罐中保存。

細(xì)胞復(fù)蘇

將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至27℃水浴中，進(jìn)行融化。

將融化的細(xì)胞轉(zhuǎn)至無菌的含5-10ml新鮮培養(yǎng)基的無菌離心管中。

200g低速離心5分鐘，緩慢倒掉上部培養(yǎng)基，不要將沉降的細(xì)胞懸起。

用15-20ml新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，確保重懸后的細(xì)胞密度為0.6×10⁶/ml左右。

將重懸的細(xì)胞放入無菌培養(yǎng)瓶中，旋蓋擰松，放在搖床中懸浮培養(yǎng)。

當(dāng)細(xì)胞密度生長達(dá)到2~3×10⁶/ml時(shí)，可以進(jìn)行傳代，傳代密度為0.4-0.5×10⁶/ml。

已發(fā)表的文獻(xiàn)

Dong Deng, Chao Xu, Pengcheng Sun. et al. Crystal structure of the human glucose transporter GLUT1. Nature. 2014 May 18. doi: 10.1038/nature13306.