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產(chǎn)品簡介

Elabscience^?自主研發(fā)的Annexin V-AF647染色液用于鑒定凋亡和壞死細(xì)胞。

Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸PS 有高度親和力，可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的PS 與凋亡早期細(xì)胞胞膜結(jié)合，將Annexin V標(biāo)記熒光染料AF647利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡。

Annexin V搭配PI或7-AAD、DAPI等DNA染色液使用，可區(qū)分處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞。

試劑組成

本試劑搭配DAPI檢測喜樹堿誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡效果如下圖所示：

Jurkat細(xì)胞用5 μM喜樹堿(Camptothecin) (左) 或未加藥 (右) 處理4 h，本試劑搭配DAPI染色后，流式細(xì)胞儀熒光檢測。Annexin V-AF647單陽細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞，Annexin V-AF647和DAPI雙陽細(xì)胞為壞死或晚期凋亡細(xì)胞，DAPI單陽細(xì)胞為裸核細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300 g離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。
注：本品僅在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中驗(yàn)證，良好的細(xì)胞狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。貼壁生長的細(xì)胞用于凋亡檢測時(shí)，可能會(huì)因?yàn)橐让赶?、吹打等處理?dǎo)致細(xì)胞的壞死或凋亡，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在不可控的影響，請謹(jǐn)慎處理。

2. 取1~5 × 105重懸的細(xì)胞，300 g離心5 min，棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入500 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer工作液重懸細(xì)胞。

3. 細(xì)胞懸液中加入5 μL的Annexin V-AF647染色液和5 μL的細(xì)胞核DNA染色液。

4. 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15~20 min。

5. 反應(yīng)完成后立即上機(jī)檢測。如不能及時(shí)檢測，請于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測。

保存條件

2~8°C可保存1年。Annexin V-AF647染色液需要避光保存。

注意事項(xiàng)

1.保質(zhì)期1年，為獲得最佳使用效果，請?jiān)?~6個(gè)月內(nèi)使用，Annexin V-AF647禁止冷凍保存。

2.染色后宜盡快檢測，時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。

3.熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，操作和存放過程盡量注意避光保存。

4.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。