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碧云天生產(chǎn)的蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(Hematoxylin and Eosin Staining Kit)綜合了多種經(jīng)典的HE染色方法，例如Harris法、Mayer法等，簡化了操作步驟，縮短了操作時間，并且染色液內(nèi)不使用汞、甲醇等有毒試劑?？梢杂糜诮M織切片或培養(yǎng)細胞的染色。

蘇木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining)，也被稱作蘇木精染色，是最常用的組織和細胞的染色方法之一。無色的蘇木素(hematoxylin)氧化后形成有醌環(huán)結(jié)構(gòu)(quinoid ring)的氧化蘇木素(hematein or haematein)，從而可以和三價的鋁離子、鐵離子等形成有顏色的帶正電荷的復合物(如hematein-Al³⁺ complexes)。氧化蘇木素(也稱氧化蘇木精)和鋁離子等形成有色的復合物的過程也被稱為Dye Lake Formation。細胞核內(nèi)基因組DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，雙鏈上的磷酸基團向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的氧化蘇木素復合物結(jié)合，從而形成細胞核染色。蘇木素染色液有多種不同的配制方法，不同的方法可以把細胞核染色成不同深淺的藍色或藍紫色。

伊紅(eosin)是一種化學合成的酸性染料，在水中解離成帶負電荷的陰離子，可以和蛋白質(zhì)氨基上帶正電荷的陽離子結(jié)合，從而使細胞胞漿染成不同程度的紅色或粉紅色，與蘇木素染色液染色形成的藍色細胞核形成鮮明對比，從而使蘇木素伊紅(HE)染色成為病理組織切片中最廣泛使用的一種常規(guī)染色方法。

蘇木素伊紅染色后細胞核呈現(xiàn)藍色，細胞漿呈現(xiàn)粉紅色或紅色。本產(chǎn)品用于石蠟切片染色的效果圖參考圖1。

圖1. 本產(chǎn)品用于小鼠睪丸石蠟切片染色的效果圖。右圖為左圖局部放大圖片。圖中可見染色后細胞核呈現(xiàn)藍色，細胞漿呈現(xiàn)粉紅色或紅色。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測條件，實際獲得的結(jié)果可能有所差別。Scale bar, 100μm。

染色液可以重復使用，直至認為效果不佳時再換用新的染色液。S包裝的本試劑盒至少可以染色200個樣品，M包裝的本試劑盒至少可以染色1000個樣品。

包裝清單：  
   

保存條件：  
   

室溫保存，至少一年有效。其中蘇木素染色液需避光保存。

注意事項：  
   

染色后的分化為選做步驟，但分化后核質(zhì)著色更清晰。

染色液可以重復使用多次，認為效果不佳時再更換新的染色液。

樣品數(shù)量很多時，可以使用碧云天生產(chǎn)的染色架和染色缸，便于操作。

第一次使用本試劑盒時建議先取1-2個樣品做預實驗。

通常不推薦在本試劑盒染色后再進行免疫熒光等其它的熒光染色。對于樣品特別珍貴的情況下，可以在本試劑盒染色后，嘗試進行免疫熒光等其它的熒光染色，但不排除有些情況下本試劑盒的染色會干擾后續(xù)的免疫熒光或其它的熒光染色。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：    
    1.需要用戶自己準備的試劑    
a.固定液：碧云天的    免疫染色固定液(P0098)，或    4%多聚甲醛固定液(P0099)。    
b.分化液(碧云天的鹽酸乙醇分化液(    C0161、    C0163、    C0165)或5%的乙酸溶液或0.5%的鹽酸乙醇)；    
c.如果需要脫水、透明和封片處理，還需自備二甲苯，和封片劑(如碧云天的    C0185 PVP封片液、    P0126 抗熒光淬滅封片液或中性樹膠等其它封片劑)，及80%乙醇、90%乙醇、無水乙醇；    
d.70%乙醇。    
    2.樣品處理    
    a.對于石蠟切片：    
二甲苯中脫蠟5-10分鐘。    
換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。    
無水乙醇5分鐘。    
90%乙醇2分鐘。    
80%乙醇2分鐘    
70%乙醇2分鐘。    
蒸餾水2分鐘。    
    b.對于冰凍切片：    
固定液固定10分鐘以上。    
蒸餾水2分鐘。    
    c.對于培養(yǎng)細胞：    
固定液固定10分鐘以上。    
蒸餾水洗滌2分鐘。    
換用新鮮的蒸餾水，再洗滌2分鐘。    
    3.蘇木素伊紅(HE)染色    
對于上述處理好的樣品：    
a.蘇木素染色液染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時間)。    
b.浸自來水中沖洗去多余的染色液，約10分鐘。    
c.蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘)。    
d.選做：根據(jù)不同分化液的分化時間，分化約2-30秒，自來水沖洗10分鐘。    
e.伊紅染色液染色30秒-2分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時間)。    
此時，如果需要直接觀察，可以用70%乙醇洗滌2次。如需脫水、透明后封片按后續(xù)步驟進行，70%乙醇洗滌后仍可按照后續(xù)步驟進行脫水、透明和封片處理。    
    4.脫水、透明、封片或進行其它染色    
    a.脫水、透明、封片：    
70%乙醇10秒，80%乙醇10秒，90%乙醇10秒，無水乙醇10秒。二甲苯透明5分鐘。    
換用新鮮的二甲苯，再透明5分鐘。    
用中性樹膠或其它封片劑封片。    
顯微鏡下觀察，細胞核呈藍色，而細胞漿呈粉紅色或紅色。    
    b.進行其它染色：    
如果進行免疫熒光染色，或進行Hoechst等熒光染料的染色，在伊紅染色液染色后：    
70%乙醇洗滌2次，每次2分鐘。    
PBS或生理鹽水或TBS或TBST等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡5分鐘。    
然后就可以進行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色了。如果免疫熒光染色等的效果不佳，可能染料對抗體結(jié)合等有影響，請單獨染色。    
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