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一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒 (綠色熒光) 50次

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  • 更新2024-11-22 11:29
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產(chǎn)品介紹

    基本參數(shù)

    詳細說明

    產(chǎn)品簡介:

        碧云天生產(chǎn)的一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于經(jīng)過固定和洗滌的細胞或組織,只要經(jīng)過一步染色反應,洗滌后就可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測到呈現(xiàn)綠色熒光的凋亡細胞。
        細胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時
    抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?;蚪MDNA斷裂時,暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針熒光素(FITC)標記的dUTP(fluorescein-dUTP),從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測,這就是TUNEL(TdT--mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。注:FITC是fluorescein isothiocyanate的縮寫,實際上大多數(shù)情況下所謂的FITC即為fluorescein。
        本試劑盒有如下優(yōu)點。(1)高靈敏度:背景染色極低,陽性染色明亮,可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡,同時由于凋亡早期就有
    DNA斷裂,可以檢測到早期的細胞凋亡。(2)特異性:TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞,而不容易標記壞死細胞。(3)快速:僅需約1-2個小時即可完成。(4)方便:只需一步染色反應,洗滌后即可觀察,不必使用二抗等進行多步操作。(5)應用范圍廣:可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。
        TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂,但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時
    的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開,另一方面也不會把射線等誘導發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。
        極少數(shù)細胞凋亡時沒有DNA斷裂,此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下,最好同時檢測多個凋亡指標。
        本試劑盒足夠檢測50個樣品。
    包裝清單:

    產(chǎn)品編號

    產(chǎn)品名稱

    包裝

    C1088-1

    TdT酶

    100μl

    C1088-2

    熒光標記液

    2× 1.2ml

    C1088-3

    TdT酶稀釋液(選用)

    1ml

    說明書

    1份

    保存條件:
        -20℃保存,熒光標記液需避光保存。
    注意事項:
        需自備用于洗滌細胞的PBS或HBSS,用于封片的抗熒光淬滅封片液(P0126),用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天訂購免疫染色固定液(P0098),同時需自備含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天訂購免疫染色洗滌液(P0106)。
        如果用于石蠟切片的檢測,需自備蛋白酶K,二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天訂購。
        本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
        為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    使用說明:
    1. 對于貼壁細胞或細胞涂片:
       a. PBS或HBSS洗滌一次。
       b. 如果細胞貼得不牢,可以干燥樣品使細胞貼得更牢。
       c. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細胞30-60分鐘。
       d. 用PBS或HBSS洗滌一次。
       e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106),冰浴孵育2分鐘。
       f. 轉步驟5。
    2. 對于懸浮細胞或細胞懸液:
       a. 收集細胞(不超過200萬細胞),PBS或HBSS洗滌一次。
       b. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細胞30-60分鐘。為防止細胞聚集成
          團,宜在側擺搖床或水平搖床上緩慢搖動的同時進行固定。
       c. 用PBS或HBSS洗滌一次。
       d. 用含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)重懸細胞,冰浴孵育2分
          鐘。
       e. 轉步驟5。
    3. 對于石蠟切片:
       a. 二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘。無水乙醇5分鐘。90%乙醇2分
          鐘。70%乙醇2分鐘,蒸餾水2分鐘。
       b. 滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K,20-37℃作用15-30分鐘(不同組織的最佳作用溫度和時間需
          自行摸索)。
       c. PBS或HBSS洗滌3次。注意:這一步必須把蛋白酶K洗滌干凈,否則會嚴重干擾后續(xù)的標記反應。
       d. 轉步驟5。
    4. 對于冷凍切片:
       a. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細胞30-60分鐘。
       b. PBS或HBSS洗滌2次,每次10分鐘。
       c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106),冰浴孵育2分鐘。
       d. 轉步驟5。
    5. 配制TUNEL檢測液:
       參考下表配制適當量的TUNEL檢測液,需充分混勻。注意:配制好的TUNEL檢測液必須一次使用完
       畢,不能凍存。

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