產(chǎn)品簡介：

    碧云天生產(chǎn)的細胞凋亡－DNA Ladder抽提試劑盒，是針對細胞凋亡過程中產(chǎn)生的核小體間DNA鏈斷裂而設計的?？梢苑浅Ｓ行У爻樘嶙钚∑瑪酁?80-200bp的DNA ladder，同時又可以抽提到50kb以上的基因組DNA。
    DNA ladder也稱DNA fragmentation，是細胞凋亡的一個重要指標。通常觀察到DNA ladder，就可以判定細胞發(fā)生了凋亡。
    本試劑盒足夠抽提50個細胞或組織樣品。
包裝清單：

保存條件：
    -20℃保存，一年有效。10M 醋酸銨和TE也可以室溫保存。
注意事項：
    需自備Tris平衡苯酚、氯仿和無水乙醇。
    為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1.樣品收集
  a)對于組織樣品：
    切下組織，并剪切成小塊，置液氮中凍結，研碎或搗碎?；蛑苯颖∩蟿驖{。
  b)對于貼壁細胞：
    胰酶消化后，PBS或生理鹽水洗一次，1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細胞。
  c)對于懸浮細胞：
    1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細胞。
2.DNA ladder抽提
  a)每1毫升樣品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混勻。
  b)對于上述收集好的樣品，每5毫克組織或者10⁶個細胞中加入500微升添加了蛋白酶K的樣品裂解液，
    Vortex混勻，充分裂解組織或細胞。
  c)50℃水浴消化過夜(通常12-20小時皆可)。
  d)加入500微升Tris平衡苯酚。
  e)Vortex劇烈混勻，使有機相和水相充分混合，以達到抽提效果。4℃，12,000g離心5分鐘。
  f)緩慢吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積Tris平衡酚再抽提
    一次(同步驟e)。
  g)緩慢吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積氯仿再抽提一次
    (同步驟e)。
  h)慢慢吸出約300微升上清液，加入60微升10M醋酸銨和600微升無水乙醇，顛倒數(shù)次混勻，此時可見DNA沉
    淀產(chǎn)生。-20℃凍存1小時，以充分沉淀小片斷DNA。凍存過夜或-70℃凍存效果更佳。
  i)4℃，12, 000g 離心10分鐘，棄上清。
  j)加入600微升70%乙醇，輕輕顛倒約2次。4℃，12, 000g 離心10分鐘，小心吸去上清。注意：70%乙醇
    洗滌的時候，千萬注意避免損失一些細小的DNA沉淀，這些沉淀中大部分是你所需的DNA ladder。
  k)盡量吸除殘余的乙醇，待看不到明顯的液體時，立即加入50-100微升TE溶解DNA。注意：不可過分干燥
    基因組DNA沉淀，否則會極難溶解。如果發(fā)現(xiàn)DNA沉淀難以溶解，可以在4℃用搖床緩慢搖動過夜，以溶
    解DNA沉淀。
  l)取部分抽提得到的DNA，1%瓊脂糖凝膠電泳分析。如果細胞發(fā)生凋亡，就可以觀察到典型的DNA
    ladder。電泳時一定要注意換用新鮮配制的電泳液，DNA凝膠也要用新鮮配制的電泳液配制并新鮮配制
    后使用。電泳時為獲取最佳的電泳效果使ladder充分分開，電泳速度宜適當慢一些，凝膠宜適當長一
    些，而加樣孔宜更加扁平一些。選取適當較薄的梳齒，往往會獲得更好的ladder電泳效果。