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碧云天的細(xì)胞凍存液(Cell Culture Freezing Medium)是一種即用型的培養(yǎng)細(xì)胞低溫凍存液，適用于絕大部分的哺乳動(dòng)物細(xì)胞凍存。
本產(chǎn)品是即用型的無(wú)菌溶液，待凍存的細(xì)胞收集后，加入適量?jī)龃嬉夯靹蚣纯?，無(wú)需自行配制任何溶液，使用非常便捷。
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃的液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性長(zhǎng)期保存起來(lái)，在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。同時(shí)適度地凍存一定量的細(xì)胞，可以防止因細(xì)胞被污染或其它意外事件而使細(xì)胞無(wú)法繼續(xù)培養(yǎng)，起到了細(xì)胞保種的作用。
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇一般采用“慢凍快融”的方法，該方法能較好地保證細(xì)胞存活率。
碧云天的細(xì)胞凍存液包含了細(xì)胞凍存所需的所有組分，主要成分是高糖DMEM、適量澳洲進(jìn)口優(yōu)質(zhì)胎牛血清及DMSO等，并在此基礎(chǔ)上優(yōu)化了相關(guān)組分，可大大提高復(fù)蘇時(shí)細(xì)胞的存活率。
如果每管細(xì)胞使用1ml細(xì)胞凍存液，一個(gè)包裝的本產(chǎn)品可以用于約50管細(xì)胞的凍存。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，一年有效。4℃保存，3個(gè)月有效。
注意事項(xiàng)：
使用前需確保細(xì)胞凍存液完全融化，并輕輕混勻。融化后的細(xì)胞凍存液置于4℃保存。
請(qǐng)確保凍存前細(xì)胞生長(zhǎng)情況良好，例如處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，并且凍存時(shí)存活率大于90%。
建議細(xì)胞凍存在液氮中，可以長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行保存。如果置于-80℃保存，保存時(shí)間大約為1年。
請(qǐng)使用耐受有機(jī)溶劑的marker筆(Alcohol Resistant Marker)進(jìn)行標(biāo)記，以防做的標(biāo)記被酒精或異丙醇等有機(jī)溶劑擦掉，而不能辨識(shí)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：
1.細(xì)胞凍存
a.完全融解并混勻細(xì)胞凍存液，4℃保存?zhèn)溆谩?br/> b.對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液后用無(wú)菌PBS輕輕洗滌細(xì)胞一次以除去殘留的血清，然后用適量的細(xì)胞消化液如碧云天的胰酶細(xì)胞消化液(C0203)消化細(xì)胞。可以用移液器輕輕吹打細(xì)胞，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛剛開始可以被吹打下來(lái)(通常顯微鏡觀察細(xì)胞變圓或肉眼觀察細(xì)胞間出現(xiàn)縫隙時(shí)細(xì)胞即可被吹打下來(lái))，就可以迅速吸除胰酶，并立即加入適量含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液以終止胰酶的作用，隨后把細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，并適當(dāng)吹散和重懸。注意千萬(wàn)不要過(guò)度消化細(xì)胞，以消化至剛好能把細(xì)胞吹打下來(lái)為最佳。消化過(guò)度的細(xì)胞由于后續(xù)生長(zhǎng)狀況會(huì)比較差，通常不宜再用于冷凍保存。吹打和重懸細(xì)胞過(guò)程需要適當(dāng)輕柔，否則可能會(huì)影響復(fù)蘇時(shí)的細(xì)胞存活率。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：直接從步驟c開始。
c.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)離心管中，如15ml無(wú)菌離心管。
d.細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算出細(xì)胞總數(shù)和所需細(xì)胞凍存液的量。細(xì)胞的凍存密度一般為1×10⁶~1×10⁷ cells/ml。
e.100-200g，離心5-10分鐘，棄上清。離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞類型。
f.加入適量細(xì)胞凍存液，用移液槍輕輕吹打以重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整細(xì)胞密度(一般為1×10⁶ cells/ml或更高)。
g.分裝于1.5ml或2ml細(xì)胞凍存管中，并做好標(biāo)識(shí)。注意：須使用專門用于液氮凍存的細(xì)胞凍存管，不能使用普通的離心管。否則在后續(xù)解凍時(shí)，易發(fā)生離心管爆裂，而容易造成人身傷害。
h.將細(xì)胞凍存管放置于可逐步降低溫度的裝置如程序性凍存盒內(nèi)并放置在-80℃冰箱內(nèi)，確保冷卻速度約為1℃/min。通常冷卻速度不宜快于0.5℃/min。
i.放置在-80℃冰箱內(nèi)約24小時(shí)后轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
2.細(xì)胞復(fù)蘇
a.從液氮中取出凍存管，迅速置于37℃水浴鍋內(nèi)，輕輕晃動(dòng)(1分鐘內(nèi))，直至只剩小部分冰塊殘留。
b.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml無(wú)菌離心管中，加入約5-10ml預(yù)熱的完全培養(yǎng)基，輕輕混勻；對(duì)于一些復(fù)蘇效率很高的細(xì)胞也可直接將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管進(jìn)行下一步驟的離心。
c.100-200g，離心5-10分鐘，離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞類型。
d.確保細(xì)胞沉積于管底后，小心棄掉上清。
e.加入適量預(yù)熱的完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿中，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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