霍亂弧菌顯色培養(yǎng)基

　　(Chromogenic Vibrio Cholerae Agar)

　　用 途：

　　霍亂弧菌顯色培養(yǎng)基用于水產(chǎn)品及食物中毒樣品中霍亂弧菌的分離和鑒定。

　　原 理：

　　蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源;蔗糖為可發(fā)酵的糖類;抑菌劑抑制大部分非霍亂弧菌細(xì)菌，氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;色素與霍亂弧菌所具有的酶發(fā)生特異性反應(yīng)，水解底物，釋放出顯色基團(tuán)，在淡黃色平板上產(chǎn)生綠-藍(lán)綠色的菌落。

　　霍亂弧菌顯色培養(yǎng)基配方(每升)：

　　蛋白胨 15g

　　酵母膏粉 5g

　　蔗糖 10g

　　氯化鈉 5g

　　抑菌劑 5g

　　瓊脂 13g

　　色素 3.1g

　　最終pH 9.0±0.2

　　使用方法

　　1、取瓶?jī)?nèi)干粉56.1克，用100ml蒸餾水或純水溶解，可按比例擴(kuò)增或縮小。攪拌加熱煮沸至完全溶解，不需高壓滅菌，冷至約50℃，傾注滅菌平皿。

　　2、以無(wú)菌操作取檢樣25 g(mL)，加入堿性蛋白胨水225 mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8 000 r/min均質(zhì)1 min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊2 min，制備成1:10的均勻稀釋液。如無(wú)均質(zhì)器，則將樣品放入無(wú)菌乳缽中磨碎，然后放在500 mL的滅菌容器內(nèi)，加225 mL堿性蛋白胨水，并充分振蕩。

　　3、增菌：將上述1:10稀釋液于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)6h～8h，如有需要可進(jìn)行二次增菌。

　　4、分離

　　在增菌液中用接種環(huán)取一環(huán)，于霍亂弧菌顯色平板上劃線分離，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h。

　　5、通過驗(yàn)證試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)假定性霍亂弧菌，如氧化酶、革蘭氏染色等。

　　質(zhì)量控制：

　　本品傾注平皿后呈淡黃色，下列菌株接種后36±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí)生長(zhǎng)情況如下表:

　　注：最后的鑒定須做補(bǔ)充試驗(yàn)。

　　外觀：

　　脫水培養(yǎng)基：淺黃色具流動(dòng)性粉未。

　　制備好平板：淡黃色的膠。

　　儲(chǔ)存條件和保質(zhì)期：

　　脫水培養(yǎng)基：10-30℃，保質(zhì)期二年。 制備好平板： 2-8℃，最多保存兩周。

　　結(jié)果判斷