• 
  

• 針對(duì)種屬：mouse

• 質(zhì)粒由來(lái)源于 GeCKO (v2)庫(kù)的ZFP6120 nt向?qū)NA組成。

• 向?qū)NA指導(dǎo)Cas9蛋白去誘導(dǎo)基因組DNA中的位點(diǎn)專一的雙鏈破裂（DSB）

• 除慢病毒激活顆粒外，其他產(chǎn)品均為轉(zhuǎn)染即用型純化DNA質(zhì)粒。慢病毒激活顆粒預(yù)包被成慢病毒顆粒的形式，適用于難被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞

CRISPR/Cas9 KO Plasmid

Description
 

• 20 µg 純化的即用型的質(zhì)粒DNA，最多可供20次轉(zhuǎn)染

• 為保證最大敲除效率，ZFP61 CRISPR/Cas9 敲除質(zhì)粒 (m) 包含三個(gè)質(zhì)粒，每個(gè)質(zhì)粒都編碼Cas9 核酶和 ZFP61-特異性20nt向?qū)NA.

• gRNA 序列來(lái)源于 GeCKO (v2)文庫(kù)，指導(dǎo)Cas9蛋白去誘導(dǎo)基因組DNA雙鏈中一個(gè)特異位點(diǎn)的斷裂。

• 如果需要篩選Cas9成功誘導(dǎo)雙鏈斷裂的細(xì)胞，推薦用 ZFP61 HDR質(zhì)粒(m) (sc-423795-HDR) 共轉(zhuǎn)染。

• 關(guān)于對(duì)照抗體的可用性，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)服務(wù)

 See Protocol Online.

HDR Plasmid

Description
 

• 20 µg 純化的即用型的質(zhì)粒DNA，最多可供20次轉(zhuǎn)染

• 推薦用 ZFP61 HDR 質(zhì)粒 (m) 和 ZFP61 CRISPR/Cas9 KO 質(zhì)粒 (m) CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 (m)

• ZFP61 HDR 質(zhì)粒 (m) 包含2-3種質(zhì)粒，每一種都含有一個(gè)同源介導(dǎo)的雙鏈DNA修復(fù)（HDR）模板，與 ZFP61 CRISPR/Cas9 KO 質(zhì)粒 (m) 的剪切位點(diǎn)相對(duì)應(yīng)

• 每個(gè)HDR質(zhì)粒包含兩個(gè)800個(gè)bp同源臂，可特異地結(jié)合到相應(yīng)的Cas9誘導(dǎo)的雙鏈DNA破壞位點(diǎn)附近的基因組DNA

• 每個(gè)HDR質(zhì)粒中嵌入了一個(gè)嘌呤霉素抗性基因，從而能篩選出穩(wěn)定敲除（KO）細(xì)胞，以及一個(gè)RFP（紅色熒光蛋白）基因，可用于觀察驗(yàn)證轉(zhuǎn)染情況

• 嘌呤霉素抗性基因和紅色熒光蛋白基因的兩側(cè)是兩個(gè)LoxP位點(diǎn)，以便與接下來(lái)的Cre Vector sc-418923處理

 See Protocol Online.

Double Nickase Plasmids

Description
 

• 20 µg 純化的即用型的質(zhì)粒DNA，最多可供20次轉(zhuǎn)染

• ZFP61 雙切口酶質(zhì)粒（m）含有一對(duì)質(zhì)粒，分別編碼D10A突變的Cas9核酸酶，和目標(biāo)特異的 20 nt 向?qū)NA （gRNA），與其相應(yīng)的ZFP61 CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特異性

• 成對(duì)的向?qū)NA序列與目標(biāo)基因中約20個(gè)堿基對(duì)互補(bǔ)，從而使Cas9可以模仿DNA雙鏈斷裂（DSB），介導(dǎo)特異的基因組DNA雙切割

• 質(zhì)粒對(duì)中的一個(gè)包含供篩選使用的嘌呤霉素抗性基因；另一個(gè)包含供觀察轉(zhuǎn)染使用的綠色熒光蛋白標(biāo)記

• ZFP61雙切口酶質(zhì)粒(m2)編碼的成對(duì)的向?qū)NA與ZFP61雙切口酶質(zhì)粒(m)的編碼的向?qū)NA不同

 See Protocol Online.

CRISPR Activation Plasmids

Description
 

• 20 µg 純化的即用型的質(zhì)粒DNA，最多可供20次轉(zhuǎn)染

• ZFP61 CRISPER激活質(zhì)粒（m）是一種協(xié)同激活介質(zhì)（SAM）轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)，目的在于特定上調(diào)基因表達(dá)

• ZFP61 CRISPR激活質(zhì)粒（m）包含三種質(zhì)量比為1:1:1的質(zhì)粒：一種質(zhì)粒編碼去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了轉(zhuǎn)錄活化域VP64和殺稻瘟菌素抗性基因；一種質(zhì)粒編碼MS2-p65-HSF1融合蛋白和潮霉素抗性基因；一種質(zhì)粒編碼目標(biāo)特定的20 nt向?qū)NA和嘌呤霉素抗性基因

• 形成的SAM復(fù)合物結(jié)合到轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游大約200-250 nt的特定位點(diǎn)區(qū)域，為高效激活基因提供轉(zhuǎn)錄因子的招募

• ZFP61 CRISPR激活質(zhì)粒（m2）中編碼特異目標(biāo)的 20 nt 向?qū)NA的單鏈 gRNA (MS2) 質(zhì)粒不同于ZFP61CRISPR激活質(zhì)粒(m）的gRNA

 See Protocol Online.

Lentiviral Activation Particles

Description
 

• 200 µl 高滴度即用型CRISPR/dCas9慢病毒激活粒子

• ZFP61 慢病毒激活顆粒（m）是一種協(xié)同激活介質(zhì)（SAM）轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)，通過(guò)細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，特異高效地上調(diào)目的基因的表達(dá)

• ZFP61慢病毒激活顆粒(m)包含以下SAM激活元素：一種是去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了轉(zhuǎn)錄活化域VP64；一種是MS2-p65-HSF1融合蛋白；一種是目標(biāo)特定的20 nt向?qū)NA。它們還含有殺稻瘟菌素，潮霉素和嘌呤霉素抗性基因

• 一經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)，形成的SAM復(fù)合物結(jié)合到轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游大約200-250 nt的特定位點(diǎn)區(qū)域，為高效激活基因，招募轉(zhuǎn)錄因子

• ZFP61 慢病毒激活顆粒（m2）中編碼的特異目標(biāo)的 20 nt 向?qū)NA的gRNA不同于ZFP61慢病毒激活顆粒（m）中編碼的gRNA

 See Protocol Online.