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碧云天高通量測序服務(wù)介紹

注：以上樣品制備與質(zhì)檢技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目僅作為高通量測序的配套服務(wù)，不單獨(dú)提供相應(yīng)服務(wù)。

碧云天高通量測序技術(shù)服務(wù)詢價與訂購：

1. 請您下載并填寫《 碧云天高通量測序服務(wù)詢價表》，發(fā)送至ngs@beyotime.com，我們將為您設(shè)計最佳方案。

2. 若有訂購意向，碧云天的高通量測序技術(shù)服務(wù)人員會與您聯(lián)系，并簽訂《碧云天高通量測序技術(shù)服務(wù)協(xié)議書》。

3. 送樣時，請下載并填寫《碧云天高通量測序生物樣品信息表》，發(fā)送至ngs@beyotime.com或碧云天高通量測序技術(shù)服務(wù)人員郵箱。樣品的具體要求參見《碧云天高通量測序生物送樣要求》。

碧云天高通量測序技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢：

1. 技術(shù)經(jīng)驗(yàn)豐富：碧云天擁有強(qiáng)大的技術(shù)團(tuán)隊，具有多年的核酸純化試劑盒開發(fā)經(jīng)驗(yàn)，在核酸樣品處理方面有豐富的操作經(jīng)驗(yàn)。

2. 分析能力強(qiáng)：碧云天有專業(yè)的生物信息分析團(tuán)隊，為您提供完善的分析服務(wù)。

3. 服務(wù)全面快速：碧云天有多年的試劑研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，有完備的分子生物學(xué)產(chǎn)品線和完善的生物技術(shù)服務(wù)體系，可為您后繼實(shí)驗(yàn)提供跟蹤服務(wù)。另外，我們承諾以最快的速度去解決您遇到的問題。

4. 實(shí)驗(yàn)平臺靈活：碧云天現(xiàn)在主要利用主流的Illumina平臺為主，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵箪`活運(yùn)用不同的實(shí)驗(yàn)平臺的優(yōu)勢。

5. 性價比高：碧云天以最優(yōu)惠的價格為您提供最全面的服務(wù)，幫助您有效節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。

碧云天高通量測序技術(shù)服務(wù)客戶須知：

1. 樣品寄出前，請給ngs@beyotime.com或碧云天高通量測序技術(shù)服務(wù)人員郵箱發(fā)送一份填寫完整的電子版《碧云天高通量測序生物樣品信息表》；如有特殊情況，請在快遞發(fā)出前與碧云天高通量測序技術(shù)服務(wù)人員電話聯(lián)系，比如客戶自送樣品、提前寄送樣品、有其它物品隨樣品一起快遞需要額外點(diǎn)收等，以便安排人手，防止丟失。

2. 請將填寫完整的紙質(zhì)版《碧云天高通量測序生物樣品信息表》以及其它技術(shù)資料(如有)密封于塑料袋內(nèi)，隨樣品一起寄出；協(xié)議書和硬盤(數(shù)據(jù)量較大，需硬盤存儲)請另單快遞給對應(yīng)接收人員，不要與樣品一起快遞，既避免物流分揀環(huán)節(jié)導(dǎo)致合同和硬盤遺失，也避免干冰或藍(lán)冰冷凝水可能損壞文件和硬盤。

3. 如果需要進(jìn)行生物信息學(xué)分析，請在《碧云天高通量測序生物樣品信息表》的“項(xiàng)目描述”欄目里注明。

4. 樣品置于1.5ml或其它型號的低吸附離心管里；管上清楚標(biāo)明樣品名稱，樣品管上的名稱要與《碧云天高通量測序生物樣品信息表》一致，請雙人核實(shí)無誤；用parafilm膜把樣品管纏緊密封好；將樣品管置于保護(hù)用的50ml離心管或其它容器里，用適量紙、紗布或棉花塞緊，防止樣品管晃蕩，旋緊蓋子。

5. 根據(jù)樣品類型選擇室溫、藍(lán)冰或者干冰包裝，選擇最快的運(yùn)輸方式以免樣品降解；合理安排發(fā)貨時間，避免周六、周日或法定節(jié)假日到達(dá)，以免樣品丟失。低溫運(yùn)輸采用安全的干冰，不要用危險的液氮；液氮如果滲進(jìn)樣品管，在溫度發(fā)生變化時因體積膨脹有可能導(dǎo)致爆炸，毀壞樣品。

6. 項(xiàng)目結(jié)束后，剩余樣品免費(fèi)保存6個月；如果需要延長保存期或者返還，請?zhí)崆芭c碧云天高通量測序技術(shù)服務(wù)人員聯(lián)系。

7. 其它詳細(xì)的樣品要求請見《碧云天高通量測序生物送樣要求》。

碧云天單細(xì)胞全基因組重測序技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目明細(xì)：

單細(xì)胞全基因組重測序：是指運(yùn)用全基因組擴(kuò)增技術(shù)對單個細(xì)胞的基因組進(jìn)行擴(kuò)增并進(jìn)行全基因組測序，并在細(xì)胞水平進(jìn)行差異性分析的研究方法。對單個細(xì)胞基因組進(jìn)行擴(kuò)增該技術(shù)解決了基因組擴(kuò)增對微量初始模板過大的擴(kuò)增偏倚，使基因組測序的模板需求量從μg級降至單細(xì)胞水平。

技術(shù)流程
MALBAC擴(kuò)增原理技術(shù)優(yōu)勢

1. 運(yùn)用MALBAC多重退火環(huán)狀循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)，解決了基因組擴(kuò)增對微量初始模板過大的擴(kuò)增偏倚，使得單細(xì)胞中90%的基因組能夠被測序，樣品起始量可低至0.5pg

2. 通量高：每個樣本可達(dá)30X以上的數(shù)據(jù)產(chǎn)出量，海量數(shù)據(jù)用于分析

3. 覆蓋度高：能檢測到大于90%的SNP

4. 分辨率高：單堿基分辨率

5. 可檢測到基因組內(nèi)較大的結(jié)構(gòu)性變異及基因拷貝數(shù)變化等

6. 可全面發(fā)掘新的和稀有的遺傳變異

7. 更加全面、可靠的基因變異信息

8. 數(shù)據(jù)偏差小、高均一性，真實(shí)反應(yīng)樣本基因組信息

技術(shù)參數(shù)

測序平臺與方式：HiSeq, PE150
測序數(shù)據(jù)量：建議90Gb/樣本
測序及基礎(chǔ)分析周期：1G以下基因組，樣品量小于10個，每個樣品不超過10X基因組測序深度，標(biāo)準(zhǔn)流程的執(zhí)行周期約為20個工作日；樣品數(shù)量多于10個時，項(xiàng)目的執(zhí)行周期需根據(jù)項(xiàng)目的規(guī)模而定

樣品要求

1. 樣品類型： 已分離的單細(xì)胞樣本或DNA 樣品

2. 樣品需求量（單次）： 樣品建議為單細(xì)胞或DNA總量≥10pg

數(shù)據(jù)分析內(nèi)容

標(biāo)準(zhǔn)信息分析

1. 數(shù)據(jù)產(chǎn)出統(tǒng)計及堿基質(zhì)量評估

2. 去除低質(zhì)量、污染及接頭序列

3. 比對（測序深度及覆蓋度等分析）

4. 一致性序列生成

高級信息分析

• SNV/Indel對應(yīng)基因突變高級功能注釋（dbSNP, clinvar, HGMD, cosmic, 1000gemome, EAS, Pubmed等）

• CNV檢測（5M）

應(yīng)用案例

全基因組范圍檢測人單細(xì)胞中單核苷酸和拷貝數(shù)變異
Chenghang Zong, Sijia Lu, Alec R. Chapman, and X. Sunney Xie. Genome-Wide Detection of Single Nucleotide and Copy Number Variations of a Single Human Cell. Science. 2012 December 21; 338(6114): 1622–1626.

由于DNA的動態(tài)變化，同類細(xì)胞的基因組可能會有差別。這種基因組的差別需要通過單細(xì)胞測序來檢測到，但由于基因擴(kuò)增中有偏向性，導(dǎo)致基因組覆蓋度很低。有一種新擴(kuò)增技術(shù)：多重退火環(huán)狀循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(MALBAC) 可以克服這個難題，并得到覆蓋度很一致的測序結(jié)果。MALBAC擴(kuò)增技術(shù)在對單個人細(xì)胞做平均25X測序時，可以達(dá)到93% 大于1x 的覆蓋度。 對單個腫瘤細(xì)胞進(jìn)行CNV檢測，并通過三個同類細(xì)胞的測序， 可檢測到單個的SNV，并且沒有假陽性。在全基因組范圍對癌細(xì)胞系的突變率進(jìn)行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)嘌呤-嘧啶的顛換在新獲得的SNV中異常頻繁。

單個腫瘤細(xì)胞中的拷貝數(shù)變異 (CNVs)

單細(xì)胞全基因組重測序是指運(yùn)用全基因組擴(kuò)增技術(shù)對單個細(xì)胞的基因組進(jìn)行擴(kuò)增并進(jìn)行全基因組測序，并在細(xì)胞水平進(jìn)行差異性分析的研究方法。由美國科學(xué)院院士、哈佛教授發(fā)明的MALBAC? (Multiple Annealing and Looping Based Amplification Cycles)技術(shù)，對單個細(xì)胞基因組進(jìn)行擴(kuò)增該技術(shù)解決了基因組擴(kuò)增對微量初始模板過大的擴(kuò)增偏倚，使基因組測序的模板需求量從μg級降至單細(xì)胞水平，使得單細(xì)胞中90%的基因組能夠被測序，為微生物生態(tài)學(xué)、癌癥基因組、法醫(yī)學(xué)、微量診斷、遺傳印記等研究打開了一扇新的大門。

碧云天高通量測序與數(shù)據(jù)分析技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目表：

備注：質(zhì)檢首次免費(fèi)，如果樣品首次質(zhì)檢不通過，后續(xù)再進(jìn)行質(zhì)檢每樣加收100元。核酸抽提與質(zhì)檢、自制文庫質(zhì)檢以及數(shù)據(jù)分析報價如下。

碧云天高通量測序樣品制備與質(zhì)檢技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目表：

碧云天NGS測序 樣本,單細(xì)胞全基因組重測序

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注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理部門申請醫(yī)療器械注冊和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途