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CRISPR/Cas9 敲除技術(shù)

       CRISPR/Cas9敲除技術(shù)的原理是Cas9結(jié)合到sgRNA上，sgRNA的引導(dǎo)序列與基因組DNA中的靶標(biāo)序列結(jié)合，Cas9切割靶標(biāo)序列產(chǎn)生雙鏈斷裂，迫使細(xì)胞進(jìn)行緊急修復(fù)，通常條件下，細(xì)胞偏向于使用非同源末端連接（NHEJ：nonhomologous DNA end joining）的方式對斷裂的雙鏈進(jìn)行修復(fù)，從而造成靶位點(diǎn)基因的插入或缺失突變，發(fā)生移碼突變可以完全敲除目標(biāo)蛋白。
CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)是繼TALEN基因敲除技術(shù)之后又一大突破，具有操作簡便，周期短，敲除效率高，作用靶點(diǎn)多，無基因、細(xì)胞及物種限制，目的基因的大小不受限制，不受轉(zhuǎn)錄本數(shù)量影響等優(yōu)勢，逐漸成為基因敲除的標(biāo)準(zhǔn)操作工具。

CRISPR/Cas9 敲除對照質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)

       CRISPR/Cas9敲除對照質(zhì)粒以pXC9-puro慢病毒載體為骨架。pXC9-puro可用于構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株，為單質(zhì)粒系統(tǒng)（能同時表達(dá)sgRNA和Cas9），具有Puro抗性基因。

CRISPR/Cas9敲除對照質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖

 

CRISPR/Cas9敲除對照質(zhì)粒的sgRNA引導(dǎo)序列

       CRISPR/Cas9敲除對照質(zhì)粒的sgRNA引導(dǎo)序列如下，在人（Homo sapiens）、小鼠（Mus musculus）、大鼠（Rattus norvegicus）等的基因組中沒有靶點(diǎn)。
 

 

pXC9-puro-C00015′-ACGGAGGCTAAGCGTCGCAA-3′pXC9-puro-C00025′-CGCTTCCGCGGCCCGTTCAA-3′pXC9-puro-C00035′-ATCGTTTCCGCTTAACGGCG-3′pXC9-puro-C00045′-GTAGGCGCGCCGCTCTCTAC-3′

 

提供結(jié)果

1、CRISPR/Cas9敲除對照質(zhì)粒：20μg，濃度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上。
2、CRISPR/Cas9敲除對照質(zhì)粒的測序圖譜、酶切鑒定結(jié)果和序列。
3、隨時出貨。
 

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