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Product Brief

• 原理說(shuō)明：正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡細(xì)胞中，PS會(huì)從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。用熒光素（FITC、Alexa Fluor488等）標(biāo)記的Annexin-V作為探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生；碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過(guò)細(xì)胞膜而將細(xì)胞核染紅。因此將Annexin-V與PI結(jié)合使用，就可以檢測(cè)出細(xì)胞群體中的早期凋亡細(xì)胞與晚期凋亡細(xì)胞。

  試劑盒組分：

  
  

  組分	MK1028-20 (20次實(shí)驗(yàn))	MK1028-50 (50次實(shí)驗(yàn))	MK1028-100 (100次實(shí)驗(yàn))
  Annexin V-FITC	100μl	250μl	500μl
  Propidium Iodide(PI)	100μl	250μl	500μl
  Binding Buffer	10ml	25ml	50ml

  
  

  
  使用方法: 

  注意事項(xiàng)：

  實(shí)驗(yàn)參考：

  

  凋亡誘導(dǎo)劑處理JK細(xì)胞，37℃，5%CO2培養(yǎng)4h,參照說(shuō)明書操作，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果如下：

   處理前 ：正常細(xì)胞占比較高，早期凋亡細(xì)胞與晚期凋亡細(xì)胞較少。

  （紅色部分為正常細(xì)胞，藍(lán)色為早期凋亡細(xì)胞，綠色為晚期凋亡細(xì)胞，品紅色為壞死細(xì)胞 ）

   

  處理后：正常細(xì)胞明顯減少，早期凋亡細(xì)胞明顯增加 。    

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  <img onclick="xshow(this)" src="http://img.lianshimall.com/statics/attachment/goods/pl20151218/boshide/MK1028.jpg" alt="Jurkat細(xì)胞  Annexin V-FITC PI凋亡試劑盒(MK1028)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)" />

  Jurkat細(xì)胞  Annexin V-FITC PI凋亡試劑盒(MK1028)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)

  
  

  
  

  
  

1. 1. Annexin V-FITC與PI量微，請(qǐng)?jiān)谑褂们半x心集液。

2. 2. Annexin V-FITC與PI需低溫避光儲(chǔ)存。

3. 3. PI有毒，能透過(guò)皮膚進(jìn)入體內(nèi)，使用時(shí)注意必要防護(hù)。

4. 4. 本試劑盒適用于細(xì)胞樣本，不適用于組織檢測(cè)。

5. 5. 檢測(cè)細(xì)胞不能固定。

6. 1. 懸浮細(xì)胞，2000rpm離心5min收集細(xì)胞;對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短(過(guò)長(zhǎng)細(xì)胞膜破碎，造成假陽(yáng)性，過(guò)短，細(xì)胞黏連影響檢測(cè))最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，吸除胰酶消化液，加入細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化，2000rpm離心5min收集細(xì)胞。

7. 2. 4℃預(yù)冷PBS，洗滌細(xì)胞2次（2000rpm x 5min）,收集細(xì)胞2～5×105 。

8. 3. 離心棄上清，加入500μL結(jié)合緩沖液，輕輕吹打重懸細(xì)胞。

9. 4. 加入5μL Annexin V-FITC，輕輕吹打混勻，加入5μL PI 輕輕吹打混勻,室溫避光孵育5-15min。(PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,時(shí)間允許，可以在檢測(cè)前5分鐘加入PI)

10. 5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)或熒光顯微鏡觀察。最好在1h內(nèi)檢測(cè)。

Instructions

此試劑盒包含ANNEXIN V-FITC 及PI兩種主要試劑,另含有結(jié)合緩沖液,主要針對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。