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Product Brief

• 原理說明：正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡細胞中，PS會從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。用熒光素（FITC、Alexa Fluor488等）標(biāo)記的Annexin-V作為探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生；碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而將細胞核染紅。因此將Annexin-V與PI結(jié)合使用，就可以檢測出細胞群體中的早期凋亡細胞與晚期凋亡細胞。

  試劑盒組分：

  
  

  組分	MK1028-20 (20次實驗)	MK1028-50 (50次實驗)	MK1028-100 (100次實驗)
  Annexin V-FITC	100μl	250μl	500μl
  Propidium Iodide(PI)	100μl	250μl	500μl
  Binding Buffer	10ml	25ml	50ml

  
  

  
  使用方法: 

  注意事項：

  實驗參考：

  

  凋亡誘導(dǎo)劑處理JK細胞，37℃，5%CO2培養(yǎng)4h,參照說明書操作，經(jīng)流式細胞儀檢測結(jié)果如下：

   處理前 ：正常細胞占比較高，早期凋亡細胞與晚期凋亡細胞較少。

  （紅色部分為正常細胞，藍色為早期凋亡細胞，綠色為晚期凋亡細胞，品紅色為壞死細胞 ）

   

  處理后：正常細胞明顯減少，早期凋亡細胞明顯增加 。    

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  <img onclick="xshow(this)" src="http://img.lianshimall.com/statics/attachment/goods/pl20151218/boshide/MK1028.jpg" alt="Jurkat細胞  Annexin V-FITC PI凋亡試劑盒(MK1028)，流式細胞儀檢測" />

  Jurkat細胞  Annexin V-FITC PI凋亡試劑盒(MK1028)，流式細胞儀檢測

  
  

  
  

  
  

1. 1. Annexin V-FITC與PI量微，請在使用前離心集液。

2. 2. Annexin V-FITC與PI需低溫避光儲存。

3. 3. PI有毒，能透過皮膚進入體內(nèi)，使用時注意必要防護。

4. 4. 本試劑盒適用于細胞樣本，不適用于組織檢測。

5. 5. 檢測細胞不能固定。

6. 1. 懸浮細胞，2000rpm離心5min收集細胞;對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短(過長細胞膜破碎，造成假陽性，過短，細胞黏連影響檢測)最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，吸除胰酶消化液，加入細胞培養(yǎng)液終止消化，2000rpm離心5min收集細胞。

7. 2. 4℃預(yù)冷PBS，洗滌細胞2次（2000rpm x 5min）,收集細胞2～5×105 。

8. 3. 離心棄上清，加入500μL結(jié)合緩沖液，輕輕吹打重懸細胞。

9. 4. 加入5μL Annexin V-FITC，輕輕吹打混勻，加入5μL PI 輕輕吹打混勻,室溫避光孵育5-15min。(PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,時間允許，可以在檢測前5分鐘加入PI)

10. 5. 流式細胞儀檢測或熒光顯微鏡觀察。最好在1h內(nèi)檢測。

Instructions

此試劑盒包含ANNEXIN V-FITC 及PI兩種主要試劑,另含有結(jié)合緩沖液,主要針對細胞凋亡的檢測。